Picogreen是一種極為靈敏的熒光核酸染料，常用于雙鏈DNA的定量檢測(cè)。歷來(lái)DNA濃度的測(cè)定在cDNA文庫(kù)的構(gòu)建，DNA亞克隆、PCR產(chǎn)物的估測(cè)等領(lǐng)域中具有重要意義，疫苗等生物制品中殘留微量DNA的檢測(cè)更是直接關(guān)系到人類的健康。

常用的檢測(cè)核酸的方法有:1）紫外吸光法（A₂₆₀），該法操作簡(jiǎn)便，但DNA樣品中核苷酸、單鏈DNA、RNA和蛋白質(zhì)對(duì)紫外吸收信號(hào)影響很大，還容易受到核酸樣品中污染物的干擾，不能區(qū)分DNA和RNA，而且靈敏度低（ΔA₂₆₀=0.1相當(dāng)于5ug/ml的dsDNA）；2）探針雜交法，該法是傳統(tǒng)檢測(cè)微量DNA的常用方法，基本能滿足目前疫苗和**性生物制品的檢測(cè)需求，但是該法耗時(shí)較長(zhǎng)，操作繁瑣，穩(wěn)定性、敏感性和特異性較差；3）Hoechst33258染料法，Hoechst33258是一種一定程度上特異于雙鏈DNA的核酸染料，基本不受蛋白質(zhì)等污染物的干擾，可以檢測(cè)低至10ng/ml的DNA；在檢測(cè)穩(wěn)定性和靈敏度上仍達(dá)不到理想效果。Picogreen dsDNA Assay Kit 雙鏈DNA定量檢測(cè)試劑盒

Picogreen dsDNA定量法：Picogreen僅在與DNA雙鏈結(jié)合后才發(fā)出熒光，且所產(chǎn)生的熒光與DNA濃度呈正比，在存在ssDNA、RNA和單體核苷酸的條件下，可以選擇性地檢測(cè)低至25pg/ml的dsDNA。該分析在三個(gè)數(shù)量級(jí)范圍內(nèi)呈線性，且?guī)缀鯚o(wú)序列依賴性，可以**地測(cè)量多個(gè)來(lái)源的DNA，包括基因組DNA、病毒DNA、小量提取DNA或PCR擴(kuò)增產(chǎn)物。

相比傳統(tǒng)的方法，Picogreen dsDNA Quantitation Reagent定量具有以下優(yōu)勢(shì)：①靈敏度高：數(shù)量級(jí)較UV吸光讀數(shù)更敏感，可節(jié)省寶貴的樣品；②特異性強(qiáng)：在等摩爾的RNA存在的條件下，對(duì)dsDNA具有特異性；③耐受性好：耐受較高濃度的鹽、尿素、乙醇、氯仿、去垢劑、蛋白或瓊脂糖，可以直接定量PCR擴(kuò)增產(chǎn)物而無(wú)需從反應(yīng)混合物中純化DNA。④易于使用——只需在樣品中加入染料，等待5分鐘，然后讀數(shù)即可，且適用于96和384孔板；與大多數(shù)基于熒光的酶標(biāo)儀和熒光計(jì)兼容。⑤適用范圍廣：可適用于PCR的分析、芯片樣品、DNA損傷分析、酶活性分析、基因組DNA定量以及復(fù)雜混合物中dsDNA的檢測(cè)和病毒DNA定量等多種領(lǐng)域。Picogreen dsDNA Assay Kit 雙鏈DNA定量檢測(cè)試劑盒

若每次分析體積為2 mL，本試劑盒各組分試劑足夠200次分析使用，若使用微孔板或96孔板檢測(cè)，每次使用量200μl，則各組分試劑足夠2000次分析。

產(chǎn)品組分

編號(hào)	組分名稱	產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格	保存
編號(hào)	組分名稱	10225ES84/2000T	保存
10225-A	Picogreen dsDNA Quantitation Reagent	100μl×10	2~6℃避光干燥
10225-B	2×TE buffer	50ml	2~6℃（短期）或-20℃（長(zhǎng)期）
10225-C	Calf thymus DNA standard (100μg/ml)	1ml	2~6℃（短期）或-20℃（長(zhǎng)期）

運(yùn)輸和保存方法

冰袋運(yùn)輸。Picogreen dsDNA Assay Kit 雙鏈DNA定量檢測(cè)試劑盒

保存方法參照【產(chǎn)品組分】各組分保存方式。其中2×TE buffer和Calf thymus DNA standard若不經(jīng)常使用，請(qǐng)置于-20℃長(zhǎng)期保存。

注意事項(xiàng)

1）Picogreen定量試劑含有DMSO（已知有毒試劑），請(qǐng)小心操作；

2）盡管目前尚未有數(shù)據(jù)表明Picogreen具有誘變性和毒性，但是該試劑能結(jié)合雙鏈DNA，請(qǐng)操作時(shí)務(wù)必小心。

試劑準(zhǔn)備

1）1×TE buffer 的配制：將2×TE 用無(wú)菌去離子水（不含Dnase）等體積稀釋至1×工作液。

2）PicoGreen工作液的配制：使用前將PicoGreen dsDNA定量試劑回溫至室溫；PicoGreen是以100μL 200×的濃縮液形式保存于無(wú)水DMSO中的（共10管）。實(shí)驗(yàn)當(dāng)天，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需求用1×TE按1:200 的比例稀釋適量定量試劑濃縮液。例如要準(zhǔn)備足夠的操作溶液以2ml檢測(cè)體系測(cè)定20個(gè)樣品，可向19.9mL1×TE 中加入100μL PicoGreen dsDNA 定量試劑。