pPIC3.5K載體基本信息
載體名稱: | pPIC3.5K, pPIC 3.5K |
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質粒類型: | 畢赤酵母蛋白表達載體 |
表達水平: | 高拷貝 |
啟動子: | AOX1 |
克隆方法: | 多克隆位點,限制性內切酶 |
載體大小: | 9004 bp |
5' 測序引物及序列: | 5′ AOX1:5′-GACTGGTTCCAATTGACAAGC-3′ |
3' 測序引物及序列: | 3′ AOX1:5′-GCAAATGGCATTCTGACATCC-3′ |
載體標簽: | / |
載體抗性: | Ampicillin |
篩選標記: | HIS4 |
備注: |
插入基因是必需包含起始密碼子ATG。
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產品目錄號: | K173-20 |
穩(wěn)定性: | 穩(wěn)定 Stable |
組成型: | 組成型 Constitutive |
病毒/非病毒: | 非病毒 |
pPIC3.5K是一個鑒定多拷貝基因插入到畢赤酵母基因組中的載體。
1. pPIC3.5K載體大小為9004 bp。
2. 在多克隆位點區(qū)域,擁有5個單一的限制性酶切位點:BamH I,Snab I,EcoR I,Avr II和Not I。
3.胞內表達。
4.載體構建時,需要包含一個ATG啟動子,同時需要加入Kozak序列。 (Cavener and Stuart, 1991; Kozak, 1987; Kozak, 1990)
5. 畢赤酵母中使用HIS4基因篩選。
6. 將基因插入GS115和KM71的AOX1中,需要使用Sac I線性化質粒(GS115產生的基因型為His+ Mut+,KM71酵母產生的基因型為His+ MutS)。
7. 將基因插入GS115和KM71的HIS4中,需要使用Sal I線性化質粒(GS115產生的基因型為His+ Mut+,KM71酵母產生的基因型為His+ MutS)。
8. 將基因插入GS115的AOX1基因中,也可以使用Bgl II 限制酶線性化質粒,產生的酵母基因型為His+ MutS。