HMC-1人肥大細(xì)胞HMC1 Cell
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種屬
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人
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別稱
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HMC1
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組織來(lái)源
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癌細(xì)胞系
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肥大細(xì)胞白血病
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傳代比例/細(xì)胞消化
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1:2傳代
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完全培養(yǎng)基配置
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IMDM培養(yǎng)基 ；10%胎牛血清 ；1%雙抗
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形態(tài)
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細(xì)胞樣
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生長(zhǎng)特征
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懸浮生長(zhǎng)
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STR
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Amelogenin X CSF1PO 10,13 D2S1338 17,25 D3S1358 15 D5S818 12,13 D7S820 10,11 D8S1179 12
D13S317 10,11 D16S539 10,12 D18S51 14,20 D19S433 14 D21S11 29 FGA 18,20 Penta D 11
Penta E 9,19 TH01 7,9.3 TPOX 8,11 vWA 17,19
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倍增時(shí)間
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每周 2-3次
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培養(yǎng)條件
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氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
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凍存條件
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凍存液：90%FBS，DMSO 10%,
或使用非程序凍存液：
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備注
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該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞，請(qǐng)注意離心收集細(xì)胞懸液，請(qǐng)勿直接倒掉細(xì)胞培養(yǎng)液。
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產(chǎn)品使用
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于科學(xué)研究，不可作為動(dòng)物或人類的產(chǎn)品使用。
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傳代方法
顯微鏡下觀察細(xì)胞，當(dāng)覆蓋80%底面積時(shí)，進(jìn)行細(xì)胞傳代。注意不要等到細(xì)胞覆蓋100%的時(shí)候才傳代，那樣細(xì)胞容易老化。在生物柜或者超凈臺(tái)中，將培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)基倒到廢液缸中用PBS或者生理鹽水洗一遍加入1.5ml
0.25%含有EDTA的胰酶，在37℃培養(yǎng)箱中消化3-5分鐘后取出細(xì)胞，加入5ml培養(yǎng)基，吹打均勻后，轉(zhuǎn)移到15ml離心管中，1000rpm 離心5分鐘離心后，去掉上清，用新鮮培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，按照1:3的比例進(jìn)行細(xì)胞傳代培養(yǎng)。
傳代密度均勻，有以下幾點(diǎn)比較重要：
1.盡量消化細(xì)胞分散成單細(xì)胞懸液。對(duì)于易于消化的細(xì)胞，我一般DPBS清洗一遍，加0.5ml胰酶潤(rùn)洗一遍（25cm2培養(yǎng)瓶或6孔板），棄掉胰酶，37度消化2-3分鐘或室溫消化5min左右，鏡下觀察是否細(xì)胞消化較為分散。如果不夠，延長(zhǎng)消化時(shí)間。我見過有些剛進(jìn)實(shí)驗(yàn)室的師弟師妹，一上來(lái)就加1-2ml胰酶，結(jié)果細(xì)胞團(tuán)大片脫落，雖然有后續(xù)吹打步驟，但我覺得效果不佳。至于難消化的細(xì)胞，怎么掌握分寸，還待自己摸索或其他戰(zhàn)友分享。
2.在以上基礎(chǔ)上，我覺得細(xì)胞吹勻，這步比上述提到的十字移動(dòng)等更為重要。如傳代1:4 ,可以收集所有細(xì)胞至離心管，加入培養(yǎng)液重懸混勻，吸管緩慢吹打20-30次，可配合水平搖晃離心管。
3.此外我覺得培養(yǎng)液的量可能也會(huì)有講究，如6孔板中你終加入2ml細(xì)胞懸液，尤其像這樣的小面積培養(yǎng)皿，液體表面有張力，細(xì)胞易于聚集在中間，所以我一般6孔板再加1ml以消除影響，吸管緩慢吹打15-20次左右繼續(xù)混勻。
來(lái)源于一名 52 歲男性肥大細(xì)胞白血病患者的外周血樣本。該細(xì)胞有多重亞型分別為：HMC-1 5C6，HMC-1.1 ，HMC-1.2 。廣泛用于人肥大細(xì)胞功能研究，因?yàn)樗鼈儽憩F(xiàn)出組織肥大細(xì)胞的許多關(guān)鍵特征，例如組胺、類胰蛋白酶、肝素和類似細(xì)胞表面抗原譜的表達(dá) （1,2）。受體酪氨酸激酶 KIT 在肥大細(xì)胞上表達(dá)，在肥大細(xì)胞的增殖、功能和存活中起重要作用。KIT 中的激活突變與肥大細(xì)胞生長(zhǎng)失調(diào)有關(guān)，并與肥大細(xì)胞腫瘤和系統(tǒng)性肥大細(xì)胞增多癥有關(guān)。據(jù)報(bào)道，HMC-1 細(xì)胞系中存在兩個(gè) KIT 激活點(diǎn)突變 。這兩種突變都將受體轉(zhuǎn)化為組成型酪氨酸磷酸化和活性狀態(tài)，導(dǎo)致生長(zhǎng)因子非依賴性增殖。HMC-1.1 （HMC-1（560）） 和 HMC-1.2 （HMC-1（560,816））是HMC-1 細(xì)胞系的兩個(gè)變異亞系。HMC-1.1 具有 V560G 突變，但不具有 D816V 突變。HMC-1.2 同時(shí)具有 V560G 和D816V 突變，并且表現(xiàn)出比 HMC-1.1 更高的增殖率。有人認(rèn)為，HMC-1.2 的較高增殖潛力可能歸因于 D816V 突變